2024/09/18
Cytiva作為生命科學領域的領xian企業,其蛋白質免疫印跡實驗產品涵蓋了從樣品制備、電泳分離、轉膜、免疫檢測到結果分析的整個實驗流程,今天重點給大家推薦幾款熱銷產品。
蛋白免疫印跡
蛋白免疫印跡(Western Blot)是將電泳分離后的細胞或組織總蛋白質從凝膠轉移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然后用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質檢測技術,現已廣泛應用于基因在蛋白水平的表達研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個方面。
電泳
利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)技術,在電場作用下,將生物樣本中的蛋白質分子根據其分子量大小在凝膠上進行分離。SDS(十二烷基硫酸鈉)是一種強陰離子表面活性劑,它能斷開蛋白質分子內的氫鍵和破壞蛋白質分子的二級、三級結構,使其解聚成單鏈分子,并通過與SDS結合形成帶負電荷的復合物,從而在電場中遷移。
Cytiva提供多種分子量范圍的蛋白Marker,包括低分子量、高分子量和全分子量等,以滿足不同實驗的需求。預染彩虹Marker采用高強度、預先染色的技術,條帶顏色鮮艷獨特,便于在電泳過程中直接觀察,無需額外的染色步驟。部分Marker如ECL? DualVue Marker和ECL? Plex熒光彩虹Marker,還結合了化學發光和熒光檢測技術,提供了更高的靈敏度和分辨率。
轉膜
將SDS-PAGE凝膠上分離的蛋白質通過電轉移的方式轉移到固相載體上,如NC膜或PVDF膜。固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,同時保持其電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。
Cytiva的膜產品以其高結合載量、低背景和出色的信噪比而聞名。Cytiva的PVDF膜和NC膜(Amersham Protran系列)是Western Blot實驗中常用的轉印膜。其膜產品具有不同的孔徑和結合特性,適用于不同分子量的蛋白質檢測。
免疫反應
將膜上的蛋白質作為抗原,與特異性抗體進行免疫反應。之后,加入酶標二抗,與一抗結合的抗原-抗體復合物結合,形成抗原-抗體-二抗復合物。
顯色檢測
通過底物顯色或熒光成像等手段,檢測特異性目的基因表達的蛋白質。常用的顯色方法包括放射自顯影、底物化學發光(ECL)、底物熒光(ECF)和底物DAB呈色等。
Cytiva提供的ECL試劑,如Amersham ECL Prime和Amersham ECL Select,都具有極高的靈敏度。這些試劑通過優化增強劑和催化劑的配方,顯著提高了信號強度和持續時間,使得即使在低豐度蛋白質的檢測中也能獲得清晰的信號。此外還具有穩定的信號輸出特性,允許在同一次實驗中多次曝光,便于處理多個印跡,降低了實驗結果的變異性。Cytiva的ECL顯色產品允許使用高稀釋度的一抗和二抗,降低了實驗的總成本。同時,高稀釋度抗體的使用也有助于降低背景噪音,提高信噪比。
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